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免疫组化操作步骤 
(酶联免疫吸附试验：猪转化生长因子β1检测8008APP幸福宝榴莲
  方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。 
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。   
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。   
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。  
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 
方法二 用于检测未知抗体的间接法： 
 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，   每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。  
 ↓   加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔   中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）  
 ↓   于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标**抗体（抗抗体）0.1ml，   37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。  
 ↓   其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。 
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  1. 榴莲视频免费观看   （1） 包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:   NaHCO3 1.59克   NaHCO3 2.93克   加蒸馏水至1000ml 
 （2） 洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M   KH2PO4 0.2克   Na2HPO4·12H2O 2.9克   NaCl 8.0克   KCl 0.2克   Tween-20 0.05％ 0.5ml   加蒸馏水至1000ml   
 （3） 稀释液：   牛血清白蛋白（BSA） 0.1克   加洗涤缓冲液至100ml   或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使
 （4） 终止液（2M H2SO4）：   蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。  
 （5） 底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:   0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml   0.1M柠檬酸（19.2克／L） 24.3ml   加蒸馏水50ml。
 （6） TMB（四甲基联苯胺）使用液:   TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml   底物缓冲液（PH5.5） 10ml   0.75％H2O2 32μl   
 （7） ABTS使用液:   ABTS 0.5mg   底物缓冲液（PH5.5） 1ml   3％H2O2 2μl  
 （8） 抗原、抗体和酶标记抗体。 
 （9） 正常人血清和阳性对照血清。 
  2. 器材:  
 （1） 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。   
 （2） 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。   
 （3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。猪转化生长因子β1检测8008APP幸福宝榴莲
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